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人血管内皮细胞生长因子 ELISA试剂盒

人血管内皮细胞生长因子 ELISA试剂盒

简要描述:名称:人血管内皮细胞生长因子 ELISA试剂盒 规格:48/96T
保存:2-8℃ 服务:免费代测
有效期:六个月 精准度:高

产品型号: ML10102

所属分类:人ELISA试剂盒

更新时间:2022-04-03

厂商性质:生产厂家

详情介绍

试验所需自备物品

1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3.37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
4.吸水纸
操作步骤
1. 对应板孔中加入50μL标准品工作液或样本后,立即每孔加入50μL生物素化抗体工作液,37℃孵育45分钟
2. 弃掉板内液体,洗板3次
3. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液,37℃孵育30分钟,弃掉板内液体,洗板5次
4. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右
5. 每孔加入50μL终止液
6. 立即在450nm波长下读数,处理数据

标本要求

1.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不

触及孔壁,轻轻晃动混匀,37℃温育 45 分钟。

3. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 4 次,拍干。

5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl。37℃温育 30 分

6. 洗涤:操作同 4。

7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育 30

分钟。

8. 洗涤:操作同 4。

9. 显色:每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。




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