人血管内皮细胞生长因子 ELISA试剂盒

试验所需自备物品

1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4.吸水纸
操作步骤
1. 对应板孔中加入50μL标准品工作液或样本后，立即每孔加入50μL生物素化抗体工作液，37℃孵育45分钟
2. 弃掉板内液体，洗板3次
3. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次
4. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右
5. 每孔加入50μL终止液
6. 立即在450nm波长下读数，处理数据

标本要求

1．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育 45 分钟。

3. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 4 次，拍干。

5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl。37℃温育 30 分

钟

6. 洗涤：操作同 4。

7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30

分钟。

8. 洗涤：操作同 4。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。