优点如下:
1、快速简便:全程约2小时,可测100例以上样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.7%。
4、回收试验: X =103.3%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可测动物血液、组织、细胞、各种培养细胞、脑脊液、胸水、腹水、尿液、胃液、植物组织以及各种水产效果均佳。
植物组织样本的前处理:
1、匀浆介质:
一般采用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水(0.86%或0.9%),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
2、组织匀浆液的制备:
①、手工匀浆:取组织块(0.2g~0.5g)在冰冷的匀浆介质中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入匀浆管中,按重量(g):体积(ml)=1:4的比例加入4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块,将玻璃匀浆管置于冰水浴条件,手动匀浆,30秒/次,间隔30秒,重复6~8次,制成20%的匀浆液。
②、机器匀浆:取组织块(0.2g~0.5g)在冰冷的匀浆介质中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入匀浆管中,按重量(g):体积(ml)=1:4的比例加入4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块,机械式匀浆机(组织捣碎机或内切式匀浆机),10000~15000转/分,冰水浴条件下,15秒/次,间隙30秒,连续3~5次,制成20%的匀浆液。
③、液氮研磨:取组织块(0.2g~0.5g)在冰冷的匀浆介质中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放
入研钵中,用眼科小剪尽快剪碎组织块,加入液氮研磨至粉末状(研磨要迅速),加入匀浆
介质,充分抽提,制备成20%的匀浆液。
镜检观察:取少量组织匀浆作涂片,显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。
匀浆上清液的制备:将制备好的20%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机3500转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定(测定相应指标的同时需测一下相应样本的蛋白浓度,总蛋白测试盒本所有售)。