马ELISA试剂盒运用双抗夹心ELISA法定量测定血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中(Ig)含量。下面我们来看看它具体的操作步骤和注意事项。
1.加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50微升不同浓度的标准品，空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6.温育：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7.洗涤：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
8.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9.终止：每孔加终止液50μl，终止反应。
10.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
马ELISA试剂盒注意事项：
1.本试剂不同批号组分不得混用。
2.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
3.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
4.马ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
5.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
6.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
7.严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
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