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详细解析山羊ELISA试剂盒的原理和操作步骤

发布时间: 2022-07-26  点击次数: 145次
  山羊ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。

  实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。

  山羊ELISA试剂盒的基本原理:
  1、抗原或抗体能吸附到固相载体表面,并保持其免疫学活性;
  2、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,仍保持其免疫学和酶学活性;
  3、酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。

  山羊ELISA试剂盒的操作步骤:
  1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差;
  2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内;
  3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时;
  4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次;
  5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟;
  6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次;
  7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照;
  8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果;
  9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
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