猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平

　　猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

 

　　猪ELISA试剂盒的组成：

　　1、结合物及标本的稀释液。

　　2、洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。

　　3、酶标记的抗原或抗体（结合物）。

　　4、酶的底物。

　　5、阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）。

　　6、已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）。

 

　　标本要求：

　　1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　2、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

 

　　猪ELISA试剂盒的注意事项：

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4、请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物请避光保存。

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9、本试剂不同批号组分不得混用。

　　10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。