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猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平

发布时间: 2022-05-28  点击次数: 141次
  猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
 
  猪ELISA试剂盒的组成:
  1、结合物及标本的稀释液。
  2、洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。
  3、酶标记的抗原或抗体(结合物)。
  4、酶的底物。
  5、阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中)。
  6、已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)。
 
  标本要求:
  1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
  猪ELISA试剂盒的注意事项:
  1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
  3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  4、请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、底物请避光保存。
  7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
  8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  9、本试剂不同批号组分不得混用。
  10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
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