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分享!小鼠白介素ELISA试剂盒的实验操作步骤

发布时间: 2022-11-26  点击次数: 76次
  小鼠白介素ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠白介素捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
 
  它的五大优点:
  1、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
  2、吸附性能好,空白值低。孔底透明度高的固相载体;
  3、稳定的重复性和可靠;
  4、高效、灵敏、特异的抗体;
  5、较大限度的节省实验经费。
 
  小鼠白介素ELISA试剂盒的实验操作步骤:
  1、把试剂混匀,切记实验时不要加理大量含有泡沫的液体,避免实验产生误差。
  2、跟数据测样决定板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔 加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
  4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7、每孔加入底物各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。一定要避免光照。
  8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
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