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关于鹿ELISA试剂盒的操作过程,主要分以下7个步骤

发布时间: 2022-04-25  点击次数: 379次
  鹿ELISA试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被牛血清白蛋白(BSA)透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中牛血清白蛋白(BSA)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中牛血清白蛋白(BSA)含量。
 

 

  鹿ELISA试剂盒的准确性:
  温育:加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
  显色:一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。用离心收集在真空血液收集管中的血液,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书方法检测。建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
 
  鹿ELISA试剂盒操作过程主要步骤总结如下:
  稀释--加样--温育--配液--洗涤--加酶--温育--洗涤--显色--终止--测定
  详细操作步骤如下:
  1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃;
  2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3、样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加;
  4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min;
  5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次;
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min;
  7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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